①构建红细胞生成素表达载体
有两种方式获得编码人红细胞生成素基因。一种是提取胎肝染色体DNA，然后以特异性寡核苷酸为引物，经聚合酶链式反应扩增出人红细胞生成素的基因片段，然后与克隆载体连接，克隆基因。另一种是提取人胎肝mRNA，逆转录合成cDNA文库，进行文库筛选，得到人红细胞生成素基因。
②构建表达红细胞生成素的细胞株
以二氢叶酸还原酶缺陷型的中国仓鼠卵巢细胞系为宿主细胞。将此细胞培养于100mm培养皿中，待细胞长满至50%～60%时，用无血清细胞培养基淋洗细胞，加入由5ml无血清培养基、10ugprEPO，10ugpDHFR，60ug脂质体组成的转染混合液，37℃培养4小时。吸出培养基，加入含10%胎牛血清的F12培养基，37℃培养过夜。随后在含青霉素、链霉素及10%胎牛血清的DEME中培养，获得抗性克隆。用胰酶消化，以1：5稀释细胞，在培养基中加入MTX至浓度为1nmol/L，继续培养10-14天，至抗性克隆出现。筛选抗性克隆。利用酶联免疫分析法确认所得到的细胞表达人红细胞生成素。
（简答题）
如何建立重组人红细胞生成素表达细胞？
正确答案
答案解析
略
相似试题
（简答题）
重组人红细胞生成素的分离纯化工艺过程。
（填空题）
重组人红细胞生成素的临床应用是治疗慢性肾功能衰竭行（）和（）。
（单选题）
外源基因表达的基本流程是（）。 ①重组表达载体导入宿主细胞； ②目的基因的获得； ③重组表达载体的筛选与认； ④目的基因与载体的重组； ⑤目的基因的表达。
（单选题）
重组人粒细胞集落刺激因子最主要的不良反应是（）
（简答题）
工程动物细胞系的建立：基本过程，表达载体设计，转化与培养方案筛选和鉴定方法。它们与基因工程微生物的异同是什么？
（单选题）
下述那个最可能产生一个重组细胞：（）
（填空题）
重组DNA导入宿主细胞的方式有（）、（）和感染。
（简答题）
重组人干扰素发酵工段的关键控制点是什么，如何实现最优化过程控制？
（名词解析）
EPO（红细胞生成素）
