血痕的性别检验主要通过检测性染色体、性激素性和性别的DNA分析。
（1）性染色体检验：人类男性染色体为XY，女性为XX。Y染色体为男性体细胞所特有。Y染色体长臂远端能与盐酸阿的平结合，发强荧光，在荧光显微镜下，可见在白细胞核膜内侧出现直径约0.3μm大小的圆形或类圆形荧光小点，即为Y染色体。若Y染色体占细胞核数10%以上，可判定为男性。男性两条性染色体（XY）均具有活性，女性（XX）则只有一条有活性，另一条固缩无活性，质致密，用氯化甲基硫堇染色，在显微镜下，见白细胞核膜内的类圆形深蓝色斑点，即为X染色体。X染色体占细胞核数10%以上为女性血痕。
（2）性激素定量测定：成年男性和女性的血清中的性激素含量差异较大，男性血清中，睾酮含量高于女性，而孕酮和雌二醇的含量比女性低。测定血痕中性激素的含量，计算男性激素与女性激素的比值或性激素与样品血红蛋白的比值，可判断血痕的性别。性激素的含量较低，一般用放射免疫分析法（RIA.等灵敏的方法测定。
（3）性别的DNA分析：从物证检材中提取DNA与Y染色体DNA探针进行分子杂交，根据是否出现杂交带，判定物证检材是来自男性还是女性。性别鉴定常采用斑点杂交法和DNA凝胶原位杂交法。PCR法也是目前检测性别的常用的方法。如物证检材是男性的组织细胞，则提取的DNA存在Y染色体，选用引物Y1.1’、Y1.2’则扩增出的产物就是Y染色体上的一段特异性片段，经过一定的PCR循环周期，将反应产物直接进行琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭（EB.染色，在紫外线光下观察，可见一条荧光带，可确定为男性。
