（题干）
本题共计 6 个问题
下图一为含有目的基因的DNA（外源DNA），图二为某质粒，表中是几种限制酶识别序列及其切割位点。用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒。
请根据上述信息分析回答：
填空题
第 1 题
外源DNA、质粒分别有（）、（）个游离的磷酸基团。
正确答案
2；0
答案解析
DNA分子的每条单链上都有一个游离的磷酸基团，因此目的基因上有2个游离的磷酸基团，而质粒是环状DNA，没有游离的磷酸基团。
填空题
第 2 题
DNA分子的一条多核苷酸链中，两个脱氧核苷酸之间以（）和（）相连。用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切开的是（）和（）之间相连的键。
正确答案
磷酸；脱氧核糖；胞嘧啶脱氧核苷酸；鸟嘌呤脱氧核苷酸
答案解析
在DNA分子结构中，核苷酸链中磷酸和脱氧核糖交替连接构成DNA分子的基本骨架。由图分析可知，SmaⅠ限制酶的切割位点在G和C两个碱基之间，因此切开的是胞嘧啶脱氧核苷酸和鸟嘌呤脱氧核苷酸之间相连的磷酸二酯键。
填空题
第 3 题
如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒，其结果是（）。
正确答案
目的基因与抗性基因被破坏
答案解析
由图可知，图一中SmaⅠ限制酶的切割位点在目的基因的中间，图二中SmaⅠ限制酶的切割位点在抗性基因上，用这种酶进行切割，目的基因与抗性基因都将被破坏，不可取。
填空题
第 4 题
如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和质粒，将目的基因片段与切割后的质粒混合，加入（）酶，获得的环状DNA可能有哪几种情况？（）。
正确答案
DNA连接；原质粒切割的粘性末端重新连接；目的基因的粘性末端连接而成环状； 目的基因与切割质粒形成重组质粒
答案解析
略
填空题
第 5 题
如果使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，比用EcoRⅠ酶切割的优点是（）。
正确答案
避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化
答案解析
BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶切割形成的粘性末端不同，这可以防止切割的目的基因和质粒的粘性末端自身环化，只获得重组质粒。
填空题
第 6 题
将重组质粒导入大肠杆菌中，培养基中需加入（）进行鉴别和筛选含有（）的细胞。
正确答案
抗生素；重组质粒(目的基因）
答案解析
质粒上的抗生素抗性基因属于标记基因，如果在培养基中加入抗生素后能存活的大肠杆菌必定是含有重组质粒的细菌。 考点：基因工程 点评：本题考查了基因工程的工具和操作程序，特别是考查了学生对限制酶的理解，锻炼了学生的识图能力、分析问题的能力和理解能力，具有一定的综合性。
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（填空题）
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（单选题）
在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用（）
