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(简答题)

假设你从细菌B(非大肠杆菌)中分离到一个质粒,命名为pBX,大小约8kb,DNA序列未知。请你设计实验,克隆和鉴定该质粒的复制原点(replication origin,ori)。

正确答案

将pBX质粒经过适当酶切,克隆到一个克隆载体(E.coli的质粒,携带某抗生素R的抗性基因)中,转化E.coli建立一个该质粒的小文库,再电转化到细菌B中,涂含R的培养基平板,阳性克隆(可以在该质粒宿主B中复制)进行测序,可初步获得该质粒的ori序列,然后进一步精确定位(外切酶酶切逐步缩短,再转化验证)。——重组质粒转化法。

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