串联亲和纯化（TAP），用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用，通过嵌入一段蛋白质标记，在目的蛋白的一端或中部导入蛋白质标记，这样便在没有破坏目的蛋白调控序列的基础上，使得被标记的目标蛋白其表达量与其在细胞中自然表达水平相当，避免了由于过量表达的导致非自然条件下的蛋白质相互作用。经过特异性的两步亲和纯化，在生理条件下与目标蛋白发生真实作用的蛋白便可被一起洗脱下来，这样得到的蛋白质复合体接着可以用质谱技术或Edman降解法进行鉴定。
方法及步骤：
（1）蛋白质标记：由蛋白A的IgG结合区（ProtA）和钙调蛋白结合区（CBP）构成，中间被一个TEV蛋白酶的酶切位点隔开；
（2）构建表达标记蛋白的细胞或组织：将编码蛋白质标记的基因片段导入目标蛋白质编码基因的特定部位；
（3）细胞抽提物的准备；
（4）串联亲和纯化；
（5）蛋白质复合体的鉴定。
（简答题）
试回答蛋白质串联亲和纯化分离原理、方法及步骤。
正确答案
答案解析
略
相似试题
（名词解析）
串联亲和纯化耦联质谱技术
（单选题）
蛋白类物质的分离纯化往往是多步骤的，其前期处理手段多采用下列哪类方法（）。
（判断题）
电泳技术一般用于蛋白质分离纯化的细分离阶段。
（填空题）
生物样品的预处理大致分为有机破坏法，去除蛋白法，分离、纯化与浓集法，缀合物的水解及化学衍生化法等。不属于有机破坏法的是（）。
（简答题）
简述蛋白质分离纯化的一般程序。
（单选题）
蛋白质分离纯化的条件不包括（）。
（填空题）
蛋白质（酶）的分离纯化主要依据蛋白质（酶）的分子大小、（）、（）、（）和（）等性质的差异。
（简答题）
简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。
（判断题）
盐析法可使蛋白质沉淀，但不引起变性，所以盐析法常用于蛋白质的分离纯化。
