原理：革兰氏染色反应与细胞壁的结构与组成有关。经过结晶紫和碘液复染，菌体内形成深紫色的结晶紫-碘复合物，对于革兰氏阴性细菌，这种复合物可用酒精从细胞内浸出，而阳性菌不容易浸出。因为阳性菌在用酒精脱色时细胞壁肽聚糖层脱色，网孔缩小以至关闭，组织“结晶紫-碘”复合物外逸，从而保留初染的紫色，而阴性菌用酒精脱色后，可引起脂质物质溶解，细胞壁透性增大，复合物溶出，菌体呈现番红复染的红色。
步骤：1.涂片，用灭菌过的接种环挑取少许菌体，放在载玻片一段的水滴中，涂成均匀的薄层
2.初染，滴加结晶紫染色液，染色1min，然后水洗至无紫色
3.媒染，用碘液冲去残余水后吸干，然后用碘液媒染1min，水洗
4.脱色，用95%的酒精脱色30s左右，立即水洗
5.复染，滴加番红染色，染色3-5min，水洗后吸干
6.镜检，低倍镜找到标本后，再用油镜观察染色后的细菌
