（1）对照标记的患者姓名，在生物安全柜内将约2ml标本置于相应前处理管中；
（2）使用吸管，将与痰标本等体积4%NaOH加入前处理管中；
（3）旋紧处理管螺旋盖，将处理管在涡旋振荡器上涡旋震荡30秒左右；
（4）将前处理管置于试管架内，置于生物安全柜内，室温静置15分钟；
（5）拧开罗氏培养管螺旋盖，检查培养基斜面底部的凝固水，如果凝固水过多，则沿着斜面相对的一面的培养管内壁，将凝固水弃去。
（6）以无菌吸管吸取前处理后的痰标本，吸取接近结束时，将吸管口移出液面，使吸管前端一段不含液体，避免液体意外滴落。
（7）保持培养基斜面水平或底端略高，均匀接种至酸性罗氏培养基斜面上，每支培养基使用接种2滴（约0、1-0、15ml），接种时第一滴液体接种至斜面中部，第二滴接种到培养基上部；
（8）将用过的吸管置于废液缸内；
（9）旋上培养管螺旋盖，不要太紧；
（10）轻轻转动并放低培养管底部，使接种的液体均匀的在斜面上铺开。
（11）将培养基放置在斜面放置架上，保持培养基斜面水平向上；
（12）连同斜面放置架将培养基置于恒温培养箱内，36±1℃孵育；
（13）24小时后，拧紧培养管螺旋盖，直立放置，36±1℃条件下继续孵育。
