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(简答题)

试述以16S rDNA为分子标记对细菌进行分类鉴定的优点和基本操作步骤。

正确答案

16SrRNA的核苷酸顺序是高度保守的,意味着这些碱基顺序在进化过程中变化很慢,所有它们能精确地指示细菌之间的亲缘关系。 基本操作步骤:
1) 寡核苷酸编目法:首先将细胞培养在含32P的培养基中以标记16SrRNA,然后提取32P标记的16SrRNA,并用核酸核酸酶分解,形成寡核苷酸。通过纸电泳法分离这些寡核苷酸,测定每个寡核苷酸的碱基顺序。通过比较16SrRNA碱基顺序的“目录”确定它与其它微生物间的关系。
2) 反转录法:将16SrRNA提取并纯化,然后用反转录酶和保守引物进行双脱氧终止法,再测定序列。
3) 直接测序法:首先分离和纯化总DNA,作为模板,然后采用PCR扩增16SrRNA,纯化后的PCR产物采用自动测序仪进行序列测定。

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