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(简答题)

如何用PCR制备突变DNA分子?

正确答案

可用PCR进行定点突变,即在特定位点引入突变。该突变可以是碱基替代、插入或者缺失。为了在靶基因特定位点导入突变,在PCR引物设计时,将一条引物设计成为与靶序列互补但在预期位点作碱基替换或缺失。在引物中的诱发突变序列应该位于引物的5′端或在引物中间部位,但绝不能位于3′端。诱变引物的3′区域(至少6~10个碱基)必须与靶DNA完全互补以使引物与模板的退火完全而且Taq酶能延伸引物。
PCR反应先在低特异性环境下反应5~10个循环以使错配得以发生(即在松弛的温度下),一旦少量的突变模板产生,就可以作为靶序列与引物完全互补。扩增反应的终产物即是所需的含有突变的扩增DNA分子,然后通过克隆和序列分析进行确证。

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