1.外植体:
①产生部位:尤其胚、下胚轴、幼根、花序轴组织、未成熟的子房等;
②生理状态:采用外植体增殖能力较强时候的状态;
③基因型。
2.培养基:特别重要的是培养基中的生长素和N源。N源:还原态氮/硝态氮适宜比值。
3.生长调节剂:
①生长素:所有生长素中,2,4-D被证明是极有效的。体胚发生2个阶段:胚的分化,胚性细胞的形成(需2,4-D);胚状体的发育(低或去除2,4-D)。2,4-D会诱导乙烯的产生,导致纤维素酶等活性升高,引起胚性细胞团的破坏。
②细胞分裂素:细胞分裂素与生长素配合促进诱导体胚形成。
③赤霉素和脱落酸:GA、ABA抑制体胚形成,但ABA可促进胚状体的正常发育,防止畸形胚的产生,尤其是对体胚成熟特别重要。细胞再分化:是指脱分化的分生细胞重新恢复分省能力,沿着正常的发育途径形成具有特定结构和功能的细胞。