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(简答题)

简述激光扫描共聚焦显微镜的工作原理。

正确答案

激光扫描共聚焦显微镜利用单色激光扫描束经过照明针孔形成点光源,对标本内焦平面上的每一点进行扫描,标本上的被照射点,在检测器的检测针孔处成像,由检测针孔后的光电倍增管逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像,照明针孔与检测针孔相对于物镜焦平面是共轭的。焦平面的点同时聚焦于照明针孔和检测针孔,焦平面以外的点不会在检测针孔处成像,这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面,克服了普通荧光显微镜图像模糊的缺点。另外在显微镜的载物台上加一个微量步进马达,可使载物台沿着Z轴上下移动,将样品各个层面移到照明针孔和检测针孔的共焦面上,样品的不同层面的图像都能清楚地显示,成为连续的光切图像。

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