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(简答题)

简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。

正确答案

M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR(RT-PCR)而建立:抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA(或总RNA),分别逆转录成为cDNA,然后行PCR随机扩增;一条引物为oligo(dA),能与单链cDNA5’端oligo(dT)结合,另一条为随机引物,能与3’端互补核苷酸序列结合,因此经过RT-PCR扩增后,能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物;扩增产物经过凝胶电泳分析,比较组间扩增产物异同,回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因,从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点:简单易行;灵敏度高;重复性好;多能性;快速。
缺点:假阳性率高,达70%以上;逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区,需要进一步的文库筛选确定有关基因。

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