（简答题）

简述随机PCR实验步骤。

正确答案

(1)先进行寡核苷酸的设计与合成：随机序列区，这是结合蛋白质的区域，长度从几个到几十个碱基不等。随机序列区两侧是确定序列区，长度一般为15-20个碱基。
(2)合成后的寡核苷酸经纯化后进行标记，制备成含有随机序列的寡核苷酸探针。
(3)进行多次的凝胶滞后实验，将随机序列中能够结合蛋白的特异性探针序列分离出来，即先经凝胶滞后实验纯化探针，经PCR扩增，再经凝胶滞后实验纯化，PCR扩增，如此多次直到只有特异性探针为止，最后将纯化的特异结合序列探针PCR扩增后，进行克隆和序列分析，序列测定后，列表统计随机序列区各碱基出现的数量，计算每一个位置上各碱基出现的频率，最终确定蛋白质结合位点。

答案解析

略

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