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(简答题)

如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记?

正确答案

首先利用T4DNA聚合酶的3’→5’外切核酸酶活性在缺乏dNTP的条件下切割dsDNA(双链DNA.,产生5‘突出端,然后加入放射性标记的dNTP,利用T4DNA聚合酶的5’→3’合成酶的活性进行填补合成,得到两端的3’端都是带标记的dsDNA。如果被标记的dsDNA中有限制性内切酶的内切位点,则可以得到两段放射性标记的探针。

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