（简答题）
大肠杆菌含有2000种以上的蛋白质，为了分离它所表达的一个外源基因的产物并保持它的活性，常有很大困难。但为了某种目的，请根据下列要求写出具体的方法。 ⑴利用溶解度差别进行分离。 ⑵利用蛋白质分子大小进行分离。 ⑶根据不同电荷进行分离。 ⑷以制备有该产物的抗体进行分离。 ⑸产物的浓缩。 ⑹纯度的鉴定。
正确答案
首先要有一种或几种检测或鉴定外源基因表达产物的方法，然后，在每一次分离纯化后检测表达产物存在哪一个级分中。⑴用硫酸铵或酒精分级沉淀，可根据蛋白质的溶解度的差别进行分离。⑵SDS-PAGE、凝胶过滤、超离心，以及超滤可对分子量不同的蛋白质进行分离。⑶对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层析、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法进行分离；但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH值至关重要，因为蛋白质的带电行为和溶液的pH值密切相关。⑷如果具备表达产物的抗体，则可以使用亲和层析或免疫沉淀的方法简洁的分离所需的表达产物。⑸使用吸附量较大的离子交换层析和亲和层析，以及对饱和硫酸铵或聚乙二醇反透析，还有冷冻干燥等方法都可以达到浓缩样品的目的，然而这些方法使用时，都存在着拖延或除去小分子化合物的问题。相比而言，选用合适截流分子量的超滤膜，进行超过滤，往往能同时达到浓缩样品和去盐（包括小分子）的目的。⑹在上述的（2）和（3）这两大类用于分离纯化产物的过程，实际上也有样品纯度鉴定的作用。此外，末端分析、质谱和反相的HPLC层析也都是有效的样品纯度鉴定的方法。但是应注意，样品的纯度是一个相对的概念。
答案解析
略
相似试题
（单选题）
一种大肠杆菌的突变株在含有乳糖没有葡萄糖的培养基中不能合成夕—半乳糖糖苷酶最可能是因为编码哪一种蛋白质的基因无义（nonsense）造成的：（）
（简答题）
现有两种培养基，一种只含有葡萄糖和盐类，一种含有酵母细胞提取物的水解产物，为研究大肠杆菌中核苷酸补救合成途径中的酶，你将选用哪种培养基培养大肠杆菌，为什么？
（单选题）
蛋白质分子组成中不含有下列哪种氨基酸（）
（单选题）
酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白、多糖、脂类和核酸等，为了进一步纯化，可用（）方法除去杂质。
（单选题）
酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白、多糖、脂类和核酸等，为了进一步纯化，可用（）方法除去杂质。
（填空题）
脂蛋白都含有四种主要脂类，它们是（）、（）、（） 和（）。
（单选题）
生石灰里含有杂质CaCO3和SiO2，为了检验是否含有这两种杂质，最适宜的试剂是（）。
（填空题）
组成蛋白质的20种氨基酸中，含有咪唑环的氨基酸是（），含硫的氨基酸有（）和（）。
（简答题）
铰链四杆机构和含有一个移动副的平面四杆机构有哪些基本类型？（各列举3种以上即可）
