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(简答题)

简述核糖核酸酶切技术分析基因突变的基本原理及其优、缺点。

正确答案

核糖核酸酶切分析(RNase cleavage)的基本原理是在一定条件下,异源双链核酸分子RNA:RNA或RNA:DNA中的错配碱基可被核糖核酸酶RNase识别并切割;利用含SP6或T7噬菌体启动子的质粒,在体外合成与野生型DNA或RNA互补的标记RNA探针,将其与待检核酸样品杂交后再用RNase处理,形成的异源双链核酸分子如有单碱基错配,会被RNase识别切割,通过分析酶切片段数量及大小可检出有无突变及点突变位置。
优点:一步反应确定突变在片段中的位置,不使用有害化学试剂。
缺点:突变检出率不高,因为错配为嘌呤碱基时RNase的切割效率低下,即使同时检测正、反义两条链,检出率也只能达到70%,且需要制备特异性RNA探针。

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