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(简答题)

简述寡核苷酸介导的定点诱变技术的原理。

正确答案

基本原理是:利用Klenow片段(DNA聚合酶I大片段)延伸与单链环状DNA模板相配对的寡核苷酸引物,这个寡核苷酸引物除了有一处与模板的碱基错配外,其余部分均与模板互补,由寡核苷酸的错配处诱发突变,并在体外新合成一个杂合双链DNA,用T4DNA连接酶将新合成的杂合双链DNA连接成双链闭环DNA分子,将体外合成的杂合闭环双链DNA转化到E.coli细胞,由于环状DNA复制的特点,就会同时产生野生型与诱变型两种DNA分子,最后通过筛选,将诱变型DNA分子筛选出来。

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