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(简答题)

PCR介导的定点诱变法。

正确答案

PCR介导的定点诱变法是一种高效定点诱变方法。其基本原理是:除了合成所需的5ˊ端及3ˊ端常规引物(a,d)之外,再合成一对带有诱变位点的互补寡核苷酸引物(b,c),具体步骤如图所示。分别利用诱变引物b和5ˊ端引物a,以及诱变引物c和3ˊ端引物d,扩增出两个诱变的DNA片段(a/b片段和c/d片段)。经去除扩增反应的剩余引物后,将扩增出两个诱变的DNA片段(a/b片段和c/d片段)等量混合、变性、退火,用Klenow DNA聚合酶补齐。再利用5ˊ端及3ˊ端引物(a,d)进行PCR扩增反应,从而得到所需的含诱变位点的DNA片段。

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