（简答题）

什么是原位杂交技术？其基本过程如何？

正确答案

根据核酸杂交原理，利用基因探针检出培养板上重组转化体菌落位置的技术。
基本过程：
（1）将硝酸纤维素滤膜铺放在生长着转化菌落的平板表面，使其中的质粒DNA转移到滤膜上。
（2）取出滤膜，作溶菌、碱变性（0.5mol/LNaOH），酸中和（Tris.ClpH7.4）等处理后，转移到一张干的滤纸上，置于室温20~30min，使滤膜干燥。将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃烘烤2h，固定DNA。
（3）带有DNA印迹的滤膜同32P标记的适当探针杂交、以检测带有重组质粒（含有被研究的DNA插入片段）的阳性菌落。
（4）将放射自显影的X光底片同保留下来的原菌落平板对照，从中挑出阳性菌落供作进一步的分析研究

答案解析

略

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