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(简答题)

设计一个实验证明某基因存在选择性剪切?

正确答案

选择性剪切:是基因工程的基础方法,应用的是限制性内切酶,因为酶具有专业性,可以在一条DNA或RNA母链中根据人类意愿剪取一段目的基因。选择性剪接形式多样,常见的主要是以下几种:
1)外显子跳过,导致外显子保留或不保留在成熟的mRNA中;
2)外显子具有多个可变使用的5’或3’剪接位点;
3)单个或多个选择性剪接外显子可以位于组成性外显子中,以便选择性外显子可以有选择的保留或不保留于成熟的mRNA中;
4)内含子不剪切,内含子可以选择性保留在成熟mRNA中以便被翻译出来。——通过剪切特定的DNA片段导入载体中再导入受体,后通过细胞培养技术,可得到有特定性状的个体。实验方法:因选择性剪切的mRNA在剪切的接合处有特定序列,因此可以使用一种定位序列来逐个分析剪切异构物。首先可以向该基因中插入几个核苷酸,然后对该基因进行深度测序,最后将测得数据与剪接点进行比对。

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