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(简答题)

简述PFGE的基本原理。

正确答案

PFGE采用一种正交的交变脉冲电场,在进行琼脂糖凝胶电泳时,其方向、脉冲时间和电压大小可交替改变。在每次电场方向改变时,DNA分子就要有一定的时间改变形状和迁移方向,只有当DNA分子达到一定构型,沿新的泳动方面伸直后,才能向前迁移。DNA分子的转向时间与其大小关系极为密切,分子越大,分子构型转换所需时间就越长,转变迁移方向的时间也就越长。对于不同大小的DNA大分子,其改变泳动方向所需的时间不等,迁移速度的快慢也就不等,因此就可以按DNA分子量大小使其分离开来。根据欲分离的DNA分子大小适当调节电场方向的相交角度、电压及脉冲时间等参数,即可将各种分子量大小不同的分子分开。

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